환경부고시 제2008 - 99 호

「환경분야 시험․검사 등에 관한 법률」 제6조에 따라 수질오염공정시험방법(환경부고시 제2007-147호, 2007.10.2)을 다음과 같이 일부 개정․고시합니다.

2008년  7월 10일

환경부장관

수질오염공정시험방법 일부개정

수질오염공정시험방법 일부를 다음과 같이 개정한다.

제명 “수질오염공정시험방법”을 “수질오염공정시험기준”으로 한다.

제1장제1호 중 “이 시험방법은 수질환경보전법 제8조”를 “이 시험기준은「환경분야 시험․검사 등에 관한 법률」제6조”로 한다.

제1장제2호(가)부터 (다)까지를 다음과 같이 한다.

(가) 「환경정책기본법」 제10조 환경기준 중 하천 및 호소에 대한 수질기준의 적합여부, 「수질 및 수생태계 보전에 관한 법률」 제12조제3항 폐수종말처리시설의 방류수수질기준, 제21조의2 물놀이 등의 행위제한 권고기준 및 제32조 배출허용기준의 적합여부, 「하수도법」 제7조 방류수수질기준의 적합여부, 「가축분뇨의 이용 및 관리에 관한 법률」 제13조의 방류수수질기준의 적합여부, 「지하수법」 제20조 지하수의 수질기준 적합여부 등은 수질오염공정시험기준(이하 “공정시험기준”이라 한다)에 따라 시험 판정한다.

(나) 「수질 및 수생태계 보전에 관한 법률」에 따른 오염실태조사 중 하천 및 호소의 오염상황조사, 「지하수법」에 따른 지하수오염 실태조사는 따로 규정이 없는 한 이 공정시험기준의 규정에 따라 시험한다.

(다) 수질오염물질의 측정에 관해서는 다른 법령(고시 등을 포함한다)에 특별히 정하고 있지 아니한 경우에는 이 공정시험기준에 따라 시험 판정한다.

제1장제3호, 제4호, 제22호 (가), (나), 제25호, 제30호 중 “공정시험방법”을 “공정시험기준”으로 하고, 같은 장 제24호 중 “공정시험방법에 의한”을 “공정시험기준에 따른”으로 한다.

제2장제3항제1호 1.1, 1.1.1 (2) (나)를 다음과 같이 한다.

(나) 「수질 및 수생태계 보전에 관한 법률」제38조제1항의 규정에 의한 비정상적인 행위를 할 경우.

제4장 제15항제3호제4호 및 제18항제3호제4호 중 “수질오염공정시험방법”을 “수질오염공정시험기준”으로 한다.

제4장제39항을 같은 장의 제50항부터 제52항까지로 하여 각각 별지 1과 같이 한다.

제4장제40항과 제41항을 각각 제39항, 제40항으로 한다.

제4장제42항을 제53항부터 제54항으로 하여 각각 별지 2와 같이 한다.

제4장제43항부터 제51항까지를 각각 제41항부터 제49항까지로 하고, 제46항 5.1 및 5.2.2, 재47항 5.1, 제48항 5.1, 제49항 5.1, 제50항 5.1 및 5.2.2, 제51항 3.5.1 중 “수질오염공정시험방법”을 “수질오염공정시험기준”으로 한다.

제4장제55항을 별지 3과 같이 신설한다.

제5장제1항 2. 2.1.1 중 “수질오염공정시험방법”을 “수질오염공정시험기준”으로 한다.

제5장제2항 2.0 및 5.0 중 “수질오염공정시험방법”을 “수질오염공정시험기준”으로 하고, 같은 항 9.1을 다음과 같이 한다.

9.1 수질오염공정시험기준 제2장제3항 “시료의 채취 및 보존방법”

제5장제3항 1.2 중 “수질환경보전법 시행령 제6조 및 시행규칙 제29조”를 “「수질 및 수생태계 보전에 관한 법률」시행령 제28조 및 제35조”로 하고, 같은 항 2.0 중 “수질오염공정시험방법”을 “수질오염공정시험기준”으로 하며, 같은 항 7.1을 다음과 같이 한다.

7.1 수질오염공정시험기준 제4장제1항 “온도”

제5장제4항 1.2 중 “수질환경보전법 시행령 제6조 및 시행규칙 제29조”를 “「수질 및 수생태계 보전에 관한 법률」시행령 제28조 및 제35조”로 하고, 같은 항 2.0 및 6.2.5 중 “수질오염공정시험방법”을  “수질오염공정시험기준”으로 하며, 같은 항 8.1을 다음과 같이 한다.

8.1. 수질오염공정시험기준 제4장제3항 “수소이온농도”

제5장제5항1.2 중 “수질환경보전법 시행령 제6조 및 시행규칙 제29조”를 “「수질 및 수생태계 보전에 관한 법률」시행령 제28조 및 제35조“로 하고, 같은 항 2.0 중 “수질오염공정시험방법”을 ”수질오염공정시험기준“으로 하며, 같은 항 8.1을 다음과 같이 한다.

8.1 수질오염공정시험기준 제4장제5항 “생물화학적산소요구량”

제5장제6항1.2 중 “수질환경보전법 시행령 제6조 및 시행규칙 제29조”를 “「수질 및 수생태계 보전에 관한 법률」시행령 제28조 및 제35조“로 하고, 같은 항 2.0 중 “수질오염공정시험방법”을 ”수질오염공정시험기준“으로 하며, 같은 항 8.1을 다음과 같이 한다.

8.1 수질오염공정시험기준 제4장제6항 “화학적산소요구량”

제5장제7항1.2 중 “수질환경보전법 시행령 제6조 및 시행규칙 제29조”를 “「수질 및 수생태계 보전에 관한 법률」시행령 제28조 및 제35조“로 하고, 같은 항 2.0 중 “수질오염공정시험방법”을 ”수질오염공정시험기준“으로 하며, 같은 항 8.1을 다음과 같이 한다.

8.1 수질오염공정시험기준 제4장제8항 “부유물질”

제5장제8항1.2 중 “수질환경보전법 시행령 제6조 및 시행규칙 제29조”를 “「수질 및 수생태계 보전에 관한 법률」시행령 제28조 및 제35조“로 하고, 같은 항 2.0 중 “수질오염공정시험방법”을 ”수질오염공정시험기준“으로 하며, 같은 항 8.1을 다음과 같이 한다.

8.1 수질오염공정시험기준 제4장제14항 “총질소”

제5장제9항1.2 중 “수질환경보전법 시행령 제6조 및 시행규칙 제29조”를 “「수질 및 수생태계 보전에 관한 법률」시행령 제28조 및 제35조“로 하고, 같은 항 2.0 중 “수질오염공정시험방법”을 ”수질오염공정시험기준“으로 하며, 같은 항 8.1을 다음과 같이 한다.

8.1 수질오염공정시험기준 제4장제17항 “총인”

제5장제10항1.2 중 “수질환경보전법 시행령 제6조 및 시행규칙 제29조”를 “「수질 및 수생태계 보전에 관한 법률」시행령 제28조 및 제35조“로 하고, 같은 항 2.0 중 “수질오염공정시험방법”을  ”수질오염공정시험기준“으로 하며, 같은 항 8.1을 다음과 같이 한다.

8.1 수질오염공정시험기준 제4장제42항 “총유기탄소”

제6장제3항을 삭제한다.

부칙

이 고시는 고시한 날부터 시행한다.

[ 별지 1]

제50항 총대장균군 - 막여과법(ES 04701.1)
(Total coliform - Membrane filtration method)

1.0 개요

1.1 목적

이 시험방법은 수계에 존재하는 총대장균군을 분석함에 있어 검사결과의 정확과 통일을 기하기 위해 필요한 제반사항에 대하여 규정함을 목적으로 한다.

1.2 적용범위

본 시험방법은 환경정책기본법의 환경기준에 규정된 총대장균군 시험에 적용하며, 총대장균군 시험방법의 제1법에 해당한다.

1.3 간섭물질

해당사항 없음

1.4 인용규격

본 시험방법은 다음과 같은 규격의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

KS M ISO 9308-1 수질-대장균체, 내열성 대장균체 및 E.coli로 추정되는 균체의 검 출 및 계산-제1부 : 막여과법

KS M ISO 5667-2 수질-시료채취-제2부 : 시료 채취 방법에 관한 지침

KS M ISO 5667-3 수질-시료채취(시료의 보존 및 취급에 대한 지침)

2.0 용어정의

“총대장균군”이란 그람음성․무아포성의 간균으로서 유당을 분해하여 가스  또는 산을 발생하는 모든 호기성 또는 통성 혐기성균, 혹은 갈락토오즈 분해효소(β-galactosidase)의 활성을 가진 세균을 말한다.

3.0 분석기기 및 기구

KS M ISO 9308-1의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

3.1 막여과장치

여과막을 끼워서 여과할 수 있게 하는 장치로 무균조작 가능한 것을 사용하며, 멸균하여 사용하여야 한다.

3.2 페트리접시

지름 약 5.5cm, 높이 약 1.2cm의 유리제품이나 1회용 플라스틱 제품으로 멸균된 것을 사용한다.

3.3 여과막 및 멸균흡수패드

셀룰로오즈 나이트레이트(Cellulose nitrate)나 셀룰로오즈 에스테르(Cellulose ester) 재질로 공경 0.45μm, 직경 47mm 크기의 미생물 분석용 여과막을 사용하며, 흡수패드는 두꺼운 여지의 직경 47mm 크기의 멸균된 것을 사용한다.

3.4 피펫

용량 5～25mL의 눈금피펫이나 자동피펫(플라스틱 피펫팁 포함)으로서 멸균된 것을 사용한다.

3.5 핀셋

끝이 뭉툭하고 넓으며 여과막을 집어 올릴 때 여과막을 손상시키지 않는 형태의 것으로 화염멸균 가능한 것을 사용한다.

3.6 배양기

배양온도를 (35 ± 0.5)℃로 유지할 수 있는 것을 사용한다.

4.0 시약 및 표준용액

KS M ISO 9308-1의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

4.1 시약

4.1.1 막여과법 배지

막여과법 고체배지는 95% 에탄올 20mL를 포함한 증류수 1L에 배지를 표 1의 막여과법 고체배지 조성대로 넣고 pH(7.2 ± 0.2)로 맞춘 다음 완전히 녹을 때까지 저어주면서 끓인다. 이 때 고압증기멸균하지 않는다. 끓인 후 45～50℃까지 식힌 다음 5～7mL를 페트리접시에 넣어 굳힌다. 조제된 배지는 2～10℃의 냉암소에서 2주간 보관할 수 있다.

표 1. 막여과법 고체배지(m-Endo agar LES) 조성

성 분	조성
효모 추출물(yeast extract)	1.2g
트립토스(tryptose)	7.5g
카지톤(casiton) 또는 트리프티케이스(trypticase) 또는 트립톤(tryptone)	3.7g
젖당(lactose, C12H22O11, 342.30)	9.4g
치오펩톤(thiopeptone) 또는 치오톤 (thiotone) 또는 펩톤 P(Peptone P)	3.7g
데속시콜린산나트륨(sodium desoxycholate)	0.1g
염화나트륨(sodium chloride, NaCl, 58.50)	3.7g
인산1수소칼륨(dipotassium phosphate, K2HPO4, 174.18)	3.3g
인산2수소칼륨(monopotassium phosphate, KH2PO4, 136.09)	1.0g
라우릴황산나트륨(sodium lauryl sulfate)	0.05g
무수아황산나트륨(sodium sulfite, Na2SO3, 126.10)	1.6g
염기성푹신(basic fuchsin)	0.8g
한천[agar, (C12H18O9)n]	10～15.0g

막여과법 액체배지의 경우에는, 고체배지와 마찬가지로 95% 에탄올 20mL를 포함한 증류수 1L에 배지를 표 2의 막여과법 액체배지 조성대로 넣고 pH(7.2 ± 0.2)로 맞춘 다음 완전히 녹을 때까지 저어주면서 끓인다. 이때 고압증기멸균하지 않는다. 끓인 후 45～50℃까지 식힌 다음 사용한다.

표 2. 막여과법 액체배지(m-Endo) 조성

성 분	조성
효모 추출물(yeast extract)	1.5g
트립토스(tryptose) 또는 폴리펩톤(polypeptone)	10.0g
카지톤(casiton) 또는 트립티케이스(trypticase)	5.0g
젖당(lactose, C12H22O11, 342.30)	12.5g
치오펩톤(thiopeptone) 또는 치오톤(thiotone)	5.0g
데속시콜린산나트륨(sodium desoxycholate)	0.1g
염화나트륨(sodium chloride, NaCl, 58.50)	5.0g
인산1수소칼륨(dipotassium phosphate, K2HPO4, 174.18)	4.375g
인산2수소칼륨(monopotassium phosphate, KH2PO4, 136.09)	1.375g
라우릴황산나트륨(sodium lauryl sulfate)	0.05g
무수아황산나트륨(sodium sulfite, Na2SO3, 126.10)	2.1g
염기성푹신(basic fuchsin)	1.05g

4.1.2 희석액

4.1.2.1 인산완충희석액

인산2수소칼륨(monopotassium phosphate, KH2PO4, 136.09) 34g을 500mL의 증류수에 녹인 후 0.5N 수산화나트륨(sodium hydroxide, NaOH, 40.00) 용액으로 실온에서 pH를 (7.2 ± 0.2)로 조정한 후 증류수를 넣어 1L가 되도록 만들어 이를 보존용 원액으로 한다. 이 보존용 원액 1.25mL와 염화마그네슘 6수화물(magnesium chloride, MgCl2·6H2O, 203.30) 81.1g을 증류수 1L에 녹여 만든 염화마그네슘용액 5.0mL를 넣은 다음 증류수로 1L가 되도록 하여 인산완충희석액을 만든 후 121℃에서 15분간 고압증기 멸균하여 사용한다.

4.1.2.2 펩톤희석액

증류수에 10% 펩톤(peptone) 용액을 넣어 펩톤의 최종 농도가 0.1%가 되도록 희석하고, 실온에서 pH가 (6.8 ± 0.2)가 되도록 조정한 다음 121℃에서 15분간 고압증기 멸균하여 사용한다.

4.2 표준용액

해당사항 없음

5.0 시료채취 및 관리

KS M ISO 5667-2, KS M ISO 5667-3의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

5.1 시료는 멸균된 용기를 이용하여 무균적으로 채취하여야 하며, 시료채취직전에 물 속에서 채수병의 뚜껑을 열고 폴리글로브를 착용하는 등 신체접촉에 의한 오염이 발생하지 않도록 유의하여야 한다.

5.2 수표면의 부유물질이나 침전물 등이 부상하여 유입되지 않도록 하여야 한다.

5.3 시료는 직사광선의 접촉을 피하여 약 10℃ 상태로 유지하여 실험실로 운반직후 분석하는 것을 원칙으로 하며, 최대 24시간을 넘기지 않도록 한다.

5.4 시료 중 잔류염소가 함유되었을 때에는 멸균된 10% 티오황산나트륨 용액으로 잔류염소를 제거하여야 한다. 120mL당 10% 티오황산나트륨 용액 0.1mL를 넣은 경우 잔류염소 15mg/L가 중화된다.

6.0 정도보증/정도관리(QA/QC)

해당사항 없음

7.0 분석절차

KS M ISO 9308-1의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

7.1 시료 전처리

해당사항 없음

7.2 시험방법

7.2.1 멸균된 핀셋으로 여과막을 눈금이 위로 가게하여 여과장치의 지지대 위에 올려놓은 후, 막여과장치의 깔때기를 조심스럽게 부착시킨다.

7.2.2 페트리접시에 20～80개의 세균 집락을 형성하도록 시료(표 3참조)를 여과관 상부에 주입하면서 흡입여과하고 멸균수 20～30mL로 씻어준다. 이 때 여과하여야 할 예상 시료량이 10mL보다 적을 경우에는 멸균된 희석액으로 희석하여 여과하여야 한다. 총대장균군수를 예측할 수 없을 경우에는 여과량을 달리하여 여러개의 시료를 분석하고, 모든 막여과 표면에서 200개 이상의 집락이 형성되지 않도록 하여야 한다.

표 3. 시료 종류별 예상 시료량

시료의 종류	여과해야할 예상 시료량 (mL)
	100	50	10	1	0.1	0.01	0.001	0.0001
호소, 저수지수 상수원수 위락용수 하천수 염소소독한 하수 하수 원수	○	○	○ ○ ○	○ ○ ○ ○	○ ○ ○ ○ ○	○ ○ ○	○ ○	○

7.2.3 막여과법 고체배지를 사용할 경우에는 여과한 여과막을 눈금이 위로 가게하여 페트리접시의 배지위에 올려놓은 다음 페트리접시를 거꾸로 놓고 (35 ± 0.5)℃에서 22～24시간 배양하며, 막여과법 액체배지를 사용할 경우에는 1.8～2.0mL의 액체배지가 들어있는 페트리접시의 흡수패드 위에 여과한 여과막을 기포가 생기지 않도록 올려놓은 다음 (35 ± 0.5)℃에서 22～24시간 동안 배양한다.

7.2.4 배양 후 금속성 광택을 띠는 분홍이나 진홍색 계통의 집락을 계수하며, 집락수가 20～80의 범위에 드는 것을 선정하여 다음의 식에 의해 계산한다.

총대장균군수/100mL		생성된 집락수	× 100
	=
		여과한 시료량 (mL)

7.2.5 배지표면에 총대장균군 이외의 다른 세균이 너무 많이 자랐을 경우에는 총대장균군수와 함께 이와 같은 내용을 비고에 기록하고 다시 같은 지점의 시료를 채취하여 검사한다. 재검사시에는 시료의 여과량을 줄이고 여과막의 수를 늘려 다른 세균에 의한 간섭현상을 줄인다.

7.2.6 본 분석방법을 처음 실시할 경우나 배지, 시약 등이 바뀔 때마다 양성대조군과 음성대조군 시험을 동시에 실시하여야 하며, 양성대조군 시험결과는 양성, 음성대조군 시험결과는 음성으로 나왔을 경우에만 유효한 결과값으로 판정한다. 이 때 양성대조군은 E.coli 표준균주를 사용하고, 음성대조군은 멸균 희석수를 사용하도록 한다.

8.0 결과보고

8.1 결과의 표기

‘총대장균군수/100mL’로 표기하며, 집락들이 서로 융합되어 있을 경우에는 ‘CG(Confluent Growth)’로, 집락수가 200이상으로 계수가 불가능한 경우에는 ‘TNTC(Too Numerous To Count)’로 표기하고 시료를 희석하거나 적게 취하여 다시 실험한다. 수질이 양호한 경우, 검출되는 총대장균군수가 일반적으로 낮으므로 모든 집락을 다 계수하여 표기하며 유효숫자 2자리 미만은 반올림하여 표기한다.

9.0 참고자료

9.1 US EPA Method 9132, 1986, Total coliform: Membrane filter technique

9.2 Standard Method 9222, 21th edition, Membrane filter technique for members of the coliform group

9.3 HPA National standard method, W2, Enumeration of coliform bacteria and Escherichia coli by membrane filtration

9.4 일본 상수시험방법 8.2.3, 2001, 총대장균군 MF 엔도배지법

9.5 환경부, 먹는물공정시험방법(2004), 1-3

9.6 한국표준협회, KS M ISO 9308-1(2005), 수질-대장균체, 내열성 대장균체 및 E.coli로 추정되는 균체의 검출 및 계산-제1부:막여과법

10.0 부록

해당사항 없음

제51항 총대장균군 - 시험관법(ES 04701.2)
(Total coliform - Multiple tube fermentation method)

1.0 개요

1.1 목적

이 시험방법은 수계에 존재하는 총대장균군을 분석함에 있어 검사결과의 정확과 통일을 기하기 위해 필요한 제반사항에 대하여 규정함을 목적으로 한다.

1.2 적용범위

본 시험방법은 환경정책기본법의 환경기준에 규정된 총대장균군 시험에 적용하며, 총대장균군 시험방법의 제2법에 해당한다.

1.3 간섭물질

해당사항 없음

1.4 인용규격

본 시험방법은 다음과 같은 규격의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

KS M ISO 9308-2 수질-대장균체, 내열성 대장균체 및 E.  Coli로 추정되는 균체의 검출 및 계산-제2부 : 다중 튜브(최적확수)법

KS M ISO 5667-2 수질-시료채취-제2부 : 시료 채취 방법에 관한 지침

KS M ISO 5667-3 수질-시료채취(시료의 보존 및 취급에 대한 지침)

2.0 용어정의

“총대장균군"이란 그람음성․무아포성의 간균으로서 유당을 분해하여 가스  또는 산을 발생하는 모든 호기성 또는 통성 혐기성균, 혹은 갈락토오즈 분해효소 (β-galactosidase)의 활성을 가진 세균을 말한다.

3.0 분석기기 및 기구

KS M ISO 9308-2의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

3.1 피펫

용량 1～25mL의 눈금피펫이나 자동피펫(플라스틱 피펫팁 포함)으로서 멸균된 것을 사용한다.

3.2 시험관

안지름 16mm, 높이 150mm 정도의 시험관으로 마개를 할 수 있고, 고압증기 멸균을 할 수 있어야 한다.

3.3 다람시험관

안지름 6mm, 높이 30mm 정도의 시험관으로 고압증기 멸균을 할 수 있어야 하며 가스포집을 위해 거꾸로 집어 넣는다.

3.4 백금이

고리의 안 지름이 약 3mm인 백금이를 사용한다.

3.5 배양기

배양 온도를 (35 ± 0.5)℃로 유지할 수 있는 것을 사용한다.

4.0 시약 및 표준용액

KS M ISO 9308-2의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

4.1 시약

4.1.1 시험관법 추정시험용 배지

증류수 1L에 배지를 표 1 또는 표 2의 조성대로 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 (6.9 ± 0.2)가 되도록 조정한 다음 다람시험관이 들어있는 시험관에 10mL씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다. 시료를 10mL로 하는 경우는 배지의 농도를 2배로 하여 사용하여야 한다.

표 1. 시험관법 추정시험용 배지(Lactose broth) 조성

성 분	조 성
소고기추출물(beef extract)	3.0g
펩톤(peptone)	5.0g
젖당(lactose, C12H22O11, 342.30)	5.0g

표 2. 시험관법 추정시험용 배지(Lauryl tryptose broth) 조성

성 분	조 성
황산라우린산나트륨(sodium lauryl sulfate, C12H25NaO4S, 288.00)	0.1g
트립토스(tryptose)	20.0g
젖당(lactose, C12H22O11, 342.30)	5.0g
인산1수소칼륨(dipotassium phosphate, K2HPO4, 174.18)	2.75g
인산2수소칼륨(monopotassium phosphate, KH2PO4, 136.09)	2.75g
염화나트륨(sodium chloride, NaCl, 58.50)	5.0g

4.1.2 시험관법 확정시험용 배지

증류수 1L에 배지를 표 3의 조성대로 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 (7.2 ± 0.2)가 되도록 조정한 다음 다람시험관이 들어있는 시험관에 10mL씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다.

표 3. 시험관법 확정시험용 배지(BGLB) 조성

성 분	조 성
소담즙(oxgall)	20.0g
펩톤(peptone)	10.0g
젖당(lactose, C12H22O11, 342.30)	10.0g
브릴리안트그린(brilliantgreen, C27H34N2O4S, 484.00)	0.0133g

4.1.3 희석액

4.1.3.1 인산완충희석액

인산2수소칼륨(monopotassium phosphate, KH2PO4, 136.09) 34g을 500mL의 증류수에 녹인 후 0.5N 수산화나트륨(sodium hydroxide, NaOH, 40.00) 용액으로 실온에서 pH를 (7.2 ± 0.2)로 조정한 후 증류수를 넣어 1L가 되도록 만들어 이를 보존용 원액으로 한다. 이 보존용 원액 1.25mL와 염화마그네슘 6수화물(magnesium chloride, MgCl2·6H2O, 203.30) 81.1g을 증류수 1L에 녹여 만든 염화마그네슘용액 5.0mL를 넣은 다음 증류수로 1L가 되도록 하여 인산완충희석액을 만든 후 121℃에서 15분간 고압증기 멸균하여 사용한다.

4.1.3.2 펩톤희석액

증류수에 10% 펩톤(peptone) 용액을 넣어 펩톤의 최종 농도가 0.1%가 되도록 희석하고, 실온에서 pH가 (6.8 ± 0.2)가 되도록 조정한 다음 121℃에서 15분간 고압증기 멸균하여 사용한다.

4.2 표준용액

해당사항 없음

5.0 시료채취 및 관리

KS M ISO 5667-2, KS M ISO 5667-3의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

5.1 시료는 멸균된 용기를 이용하여 무균적으로 채취하여야 하며, 시료채취직전에 물속에서 채수병의 뚜껑을 열고 폴리글러브를 착용하는 등 신체접촉에 의한 오염이 발생하지 않도록 유의하여야 한다.

5.2 수표면의 부유물질이나 침전물 등이 부상하여 유입되지 않도록 하여야 한다.

5.3 시료는 직사광선의 접촉을 피하여 약 10℃ 상태로 유지하여 실험실로 운반직후 분석하는 것을 원칙으로 하며, 최대 24시간을 넘기지 않도록 한다.

5.4 시료 중 잔류염소가 함유되었을 때에는 멸균된 10% 티오황산나트륨 용액으로 잔류염소를 제거하여야 한다. 120mL당 10% 티오황산나트륨 용액 0.1mL를 넣은 경우 잔류염소 15mg/L가 중화된다.

6.0 정도보증/정도관리(QA/QC)

해당사항 없음

7.0 분석절차

KS M ISO 9308-2의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

7.1 시료 전처리

해당사항 없음

7.2 시험방법

7.2.1 추정시험

7.2.1.1 시료를 10, 1, 0.1, 0.01, 0.001……mL씩 되게 10배 희석법에 따라 희석하여 사용하며, 시료의 오염정도에 따라 희석배수를 다르게 할 수 있다. 각 희석단계마다 5개의 시험관을 사용하며, 시료의 희석은 시료의 최대량을 이식한 5개의 시험관에서 전부 또는 대다수가 양성이고, 최소량을 이식한 5개의 시험관에서 전부 또는 대다수가 음성이 되도록 희석하여야 한다.

7.2.1.2 희석된 시료를 다람시험관이 들어있는 추정시험용 배지(유당 배지 또는 라우릴 트립토스 배지)에 접종하여 (35 ± 0.5)℃에서 (48 ± 3)시간까지 배양한다. 이 때, 가스가 발생하지 않는 시료는 총대장균군 음성으로 판정하고 가스발생이 있을 때에는 추정시험 양성으로 판정하며 추정시험 양성 시험관은 확정시험을 수행한다.

7.2.2 확정시험

7.2.2.1 백금이를 사용하여 추정시험 양성 시험관으로부터 확정시험용 배지(BGLB 배지)가 든 시험관에 무균적으로 이식하여 (35 ± 0.5)℃에서, (48 ± 3) 시간동안 배양한다. 이 때, 가스가 발생한 시료는 총대장균군 양성으로 판정하고, 가스가 발생하지 않는 시료는 총대장균군 음성으로 판정하며, 확정시험까지의 양성 시험관수를 최적확수표에서 찾아 총대장균군수를 결정한다. 최적확수표는 시료량이 10, 1, 0.1mL의 희석단계에 대한 최적확수가 최적확수/100mL로 표시되어 있어, 그 이상 희석을 한 시료는 희석배수를 곱하여야 한다.

8.0 결과보고

8.1  결과의 표기

총대장균군 시험관법 시험결과는 확률적인 수치인 최적확수로 나타나지만, 결과는 ‘총대장균군수/100mL’로 표기하며, 유효숫자 2자리 미만은 반올림하여 표기한다.

9.0 참고자료

9.1 US EPA Method 9131, 1986, Total coliform: Multiple tube fermentation technique

9.2 Standard Method 9221, 21th edition, Multiple-tube fermentation technique for members of the coliform group

9.3 HPA National Standard Method, D5, Enumeration of coliforms and presumptive Escherichia coli by the most probable number(MPN) technique

9.4 일본 상수시험방법 8.2.1.2, 2001, 총대장균군-유당부이온 브리리안토그린 유당담즙 부이온 배지법

9.5 환경부, 먹는물공정시험방법(2004), 1-3

9.6 한국표준협회, KS H ISO 7251(2002), 미생물학-추정 대장균 수의 계산을 위한 일반 지침-최확수법

10.0 부록

해당사항 없음

표 4. 총대장균군 시험관법 최적확수표

양 성 시험관수	MPN/	95% 신뢰구간		양 성 시험관수	MPN/	95% 신뢰구간
	100mL	하 한	상 한		100mL	하 한	상 한
0-0-0	<1.8	-	6.8	4-0-3	25	9.8	70
0-0-1	1.8	0.090	6.8	4-1-0	17	6.0	40
0-1-0	1.8	0.090	6.9	4-1-1	21	6.8	42
0-1-1	3.6	0.70	10	4-1-2	26	9.8	70
0-2-0	3.7	0.70	10	4-1-3	31	10	70
0-2-1	5.5	1.8	15	4-2-0	22	6.8	50
0-3-0	5.6	1.8	15	4-2-1	26	9.8	70
1-0-0	2.0	0.10	10	4-2-2	32	10	70
1-0-1	4.0	0.70	10	4-2-3	38	14	100
1-0-2	6.0	1.8	15	4-3-0	27	9.9	70
1-1-0	4.0	0.71	12	4-3-1	33	10	70
1-1-1	6.1	1.8	15	4-3-2	39	14	100
1-1-2	8.1	3.4	22	4-4-0	34	14	100
1-2-0	6.1	1.8	15	4-4-1	40	14	100
1-2-1	8.2	3.4	22	4-4-2	47	15	120
1-3-0	8.3	3.4	22	4-5-0	41	14	100
1-3-1	10	3.5	22	4-5-1	48	15	120
1-4-0	10	3.5	22	5-0-0	23	6.8	70
2-0-0	4.5	0.79	15	5-0-1	31	10	70
2-0-1	6.8	1.8	15	5-0-2	43	14	100
2-0-2	9.1	3.4	22	5-0-3	58	22	150
2-1-0	6.8	1.8	17	5-1-0	33	10	100
2-1-1	9.2	3.4	22	5-1-1	46	14	120
2-1-2	12	4.1	26	5-1-2	63	22	150
2-2-0	9.3	3.4	22	5-1-3	84	34	220
2-2-1	12	4.1	26	5-2-0	49	15	150
2-2-2	14	5.9	36	5-2-1	70	22	170
2-3-0	12	4.1	26	5-2-2	94	34	230
2-3-1	14	5.9	36	5-2-3	120	36	250
2-4-0	15	5.9	36	5-2-4	150	58	400
3-0-0	7.8	2.1	22	5-3-0	79	22	220
3-0-1	11	3.5	23	5-3-1	110	34	250
3-0-2	13	5.6	35	5-3-2	140	52	400
3-1-0	11	3.5	26	5-3-3	170	70	400
3-1-1	14	5.6	36	5-3-4	210	70	400
3-1-2	17	6	36	5-4-0	130	36	400
3-2-0	14	5.7	36	5-4-1	170	58	400
3-2-1	17	6.8	40	5-4-2	220	70	440
3-2-2	20	6.8	40	5-4-3	280	100	710
3-3-0	17	6.8	40	5-4-4	350	100	710
3-3-1	21	6.8	40	5-4-5	430	150	1100
3-3-2	24	9.8	70	5-5-0	240	70	710
3-4-0	21	6.8	40	5-5-1	350	100	1100
3-4-1	24	0.8	70	5-5-2	540	150	1700
3-5-0	25	9.8	70	5-5-3	920	220	2600
4-0-0	13	4.1	35	5-5-4	1600	400	4600
4-0-1	17	5.9	36	5-5-5	>1600	700	-
4-0-2	21	6.8	40

제52항 총대장균군 - 평판집락법(ES 04701.3)
(Total coliform - Pour plate method)

1.0 개요

1.1 목적

이 시험방법은 배출수 또는 방류수에 존재하는 총대장균군을 분석함에 있어 검사결과의 정확과 통일을 기하기 위해 필요한 제반사항에 대하여 규정함을 목적으로 한다.

1.2 적용범위

본 시험방법은 ⌜수질 및 수생태계 보전에 관한 법률⌟의 방류수수질기준 및 배출허용기준, ⌜하수도법⌟의 방류수수질기준, ⌜가축분뇨의 이동 및 관리에 관한 법률⌟의 방류수수질기준에 규정한 총대장균군 시험에 적용한다.

1.3 간섭물질

해당사항 없음

1.4 인용규격

본 시험방법은 다음과 같은 규격의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

KS M ISO 5667-2 수질-시료채취-제2부 : 시료 채취 방법에 관한 지침

KS M ISO 5667-3 수질-시료채취(시료의 보존 및 취급에 대한 지침)

2.0 용어정의

“총대장균군”이라 함은 그람음성․무아포성의 간균으로서 유당을 분해하여 가스  또는 산을 발생하는 모든 호기성 또는 통성 혐기성균, 혹은 갈락토오즈 분해 효소(β-galactosidase)의 활성을 가진 세균을 말한다.

3.0 분석기기 및 기구

3.1 피펫

용량 1～10mL의 눈금피펫이나 자동피펫(플라스틱피펫 팁 포함)으로서 멸균된 것을 사용한다.

3.2 페트리접시

지름 약 9cm, 높이 약 1.5cm의 유리제품이나 1회용 플라스틱제품으로 멸균된 것을 사용한다.

3.3 항온 수조

수온을 45℃ 내외로 유지할 수 있는 것을 사용한다.

3.4 배양기

배양온도를 (35 ± 0.5)℃로 유지할 수 있는 것을 사용한다.

3.5 집락계수기

확대경과 조명장치가 부착되어 있고 집락을 계수하기 좋도록 페트리접시를 놓는 판에 1㎝2로 구획이 그려진 것을 사용하며, 반드시 필요한 것은 아니다.

4.0 시약 및 표준용액

4.1. 시약

4.1.1 평판집락법 배지

증류수 1L에 배지를 표 1의 조성대로 넣고 pH(7.3 ± 0.2)로 맞춘 다음, 완전히 끓여서 녹인 후, 45～50℃까지 식혀 사용한다. 고압증기멸균 하지 않는다.

표 1. 평판집락법 배지(Desoxycholate agar) 조성

성 분	조 성
펩톤(peptone)	10.0g
젖당(lactose, C12H22O11, 342.30)	10.0g
데속시콜레이트 나트륨(sodium desoxycholate)	1.0g
염화나트륨(sodium chloride, NaCl, 58.50)	5.0g
인산1수소칼륨(dipotassium phosphate, K2HPO4, 174.18)	2.0g
구연산제이철암모늄(ferric ammonium citrate, C6H8O7.Fe.NH3, 264.85)	1.0g
구연산나트륨(trisodium citrate, Na3C6H5O7, 258.07)	1.0g
뉴트럴레드(Neutral red)	0.03g
한천[agar, (C12H18O9)n]	15.0g

4.1.2 희석액

4.1.2.1 인산완충희석액

인산2수소칼륨(monopotassium phosphate, KH2PO4, 136.09) 34g을 500mL의 증류수에 녹인 후 0.5N 수산화나트륨(sodium hydroxide, NaOH, 40.00) 용액으로 실온에서 pH를 (7.2 ± 0.2)로 조정한 후 증류수를 넣어 1L가 되도록 만들어 이를 보존용 원액으로 한다. 이 보존용 원액 1.25mL와 염화마그네슘 6수화물(magnesium chloride, MgCl2·6H2O, 203.30) 81.1g을 증류수 1L에 녹여 만든 염화마그네슘용액 5.0mL를 넣은 다음 증류수로 1L가 되도록 하여 인산완충희석액을 만든 후 121℃에서 15분간 고압증기 멸균하여 사용한다.

4.1.2.2 펩톤희석액

증류수에 10% 펩톤(peptone) 용액을 넣어 펩톤의 최종 농도가 0.1%가 되도록 희석하고, 실온에서 pH가 (6.8 ± 0.2)가 되도록 조정한 다음 121℃에서 15분간 고압증기 멸균하여 사용한다.

4.2 표준용액

해당사항 없음

5.0 시료채취 및 관리

KS M ISO 5667-2, KS M ISO 5667-3의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

5.1 시료는 멸균된 용기를 이용하여 무균적으로 채취하여야 하며, 시료채취직전에 물 속에서 채수병의 뚜껑을 열고 폴리글로브를 착용하는 등 신체접촉에 의한 오염이 발생하지 않도록 유의하여야 한다.

5.2 수표면의 부유물질이나 침전물 등이 부상하여 유입되지 않도록 하여야 한다.

5.3 시료는 채취 후 직사광선의 접촉을 피하여 약 10℃ 상태로 유지하여 6시간 이내에 실험실로 운반하여 2시간 이내에 분석을 완료하여야 한다. 만약 규정된 시간 내에 분석이 불가능할 경우에는 현장에서 분석이 가능하도록 하여야 한다.

5.4 시료 중 잔류염소가 함유되었을 때에는 멸균된 10% 티오황산나트륨 용액으로 잔류염소를 제거하여야 한다. 120mL당 10% 티오황산나트륨 용액 0.1mL를 넣은 경우 잔류염소 15mg/L가 중화된다.

6.0 정도보증/정도관리(QA/QC)

해당사항 없음

7.0 분석절차

7.1 시료 전처리

해당사항 없음

7.2 시험방법

7.2.1 평판집락수가 30～300개가 되도록 시료를 희석 후, 1mL씩을 시료당 2매의 페트리접시에 넣는다.

멸균된 배지를 시험에 사용하기 전에 항온수조를 이용하여 45℃ 내외로 유지시키되, 3시간을 경과시키지 않는 것이 좋다. 또한 시료의 희석부터 배지를 페트리접시에 넣을 때까지 조작시간은 20분을 초과하지 말아야 한다.

7.2.2 페트리접시에 미리 45℃로 유지한 평판집락법 배지를 약 15mL 넣은 후 굳기 전에 좌우로 10회전 이상 흔들어 시료와 배지를 완전히 섞은 후 실온에서 굳힌다.

7.2.3 굳힌 페트리접시의 배지표면에 다시 45℃로 유지된 평판집락법 배지를 3～5 mL 넣어 표면을 얇게 덮고 실온에서 정치하여 굳힌 후 (35 ± 0.5)℃에서 18～20시간 배양한 다음 진한 적색의 전형적인 집락을 계수한다.

7.2.4 정확성을 기하기 위하여 실험할 때마다 1개 이상의 음성대조군 시험을 상기 방법과 동일한 조건하에서 같이 실시하여야 하며, 이 때 음성대조군 평판에서는 전형적인 총대장균군의 집락이 없어야 한다. 또한, 분석방법을 처음 실시할 경우나 배지, 시약 등이 바뀔 때마다 양성대조군과 음성대조군 시험을 동시에 실시하여야 하며, 양성대조군 시험결과는 양성, 음성대조군 시험결과는 음성으로 나왔을 경우에만 유효한 결과값으로 판정한다. 이 때 양성대조군은 E.coli 표준균주를 사용하고, 음성대조군은 멸균 희석수를 사용하도록 한다.

8.0 결과보고

8.1 결과의 표기

집락수가 30～300의 범위에 드는 것을 산술평균하여 ‘총대장균군수/mL’로 표기한다. 모든 시험평판의 집락수가 30미만일 경우, 결과는 <30으로 표기하고 유효숫자 2자리 미만은 반올림하여 표기한다.

9.0 참고자료

9.1 일본 상수시험방법 8.2.1, 2001, 대장균군-데속시콜산염 한천배지법

10.0 부록

해당사항 없음

[별지 2]

제53항 분원성대장균군 - 막여과법(ES 04702.1)
(Fecal coliform - Membrane filtration method)

1.0 개요

1.1 목적

이 시험방법은 수계에 존재하는 분원성대장균군을 분석함에 있어 검사결과의 정확과 통일을 기하기 위해 필요한 제반사항에 대하여 규정함을 목적으로 한다.

1.2 적용범위

본 시험방법은 환경정책기본법의 환경기준에 규정된 분원성대장균군 시험에 적용하며, 분원성대장균군 시험방법의 제1법에 해당한다.

1.3 간섭물질

해당사항 없음

1.4 인용규격

본 시험방법은 다음과 같은 규격의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

KS M ISO 9308-1 수질-대장균체, 내열성 대장균체 및 E.Coli로 추정되는 균체의 검 출 및 계산-제1부 : 막여과법

KS M ISO 5667-2 수질-시료채취-제2부 : 시료 채취 방법에 관한 지침

KS M ISO 5667-3 수질-시료채취(시료의 보존 및 취급에 대한 지침)

2.0 용어정의

“분원성대장균군”이란 온혈동물의 배설물에서 발견되는 그람음성․무아포성의 간균으로서 44.5℃에서 유당을 분해하여 가스 또는 산을 발생하는 모든 호기성 또는 통성 혐기성균을 말한다.

3.0 분석기기 및 기구

KS M ISO 9308-1의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

3.1 막여과장치

여과막을 끼워서 여과할 수 있게 하는 장치로 무균조작 가능한 것을 사용하며, 멸균하여 사용하여야 한다.

3.2 페트리접시

지름 약 5.5cm, 높이 약 1.2cm의 유리제품이나 1회용 플라스틱 제품으로 멸균된 것을 사용한다.

3.3 여과막 및 멸균흡수패드

셀룰로오즈 나이트레이트(Cellulose nitrate)나 셀룰로오즈 에스테르(Cellulose ester) 재질로 공경 0.45μm, 직경 47mm크기의 미생물 분석용 여과막을 사용하며, 흡수패드는 두꺼운 여지의 직경 47mm크기의 멸균된 것을 사용한다.

3.4 피펫

용량 5～25mL의 눈금피펫이나 자동피펫(플라스틱 피펫팁 포함)으로서 멸균된 것을 사용한다.

3.5 핀셋

끝이 뭉툭하고 넓으며 여과막을 집어 올릴 때 여과막을 손상시키지 않는 형태의 것으로 화염멸균 가능한 것을 사용한다.

3.6 배양기 또는 항온수조

배양온도를 (44.5 ± 0.2)℃로 유지할 수 있는 것을 사용한다.

4.0 시약 및 표준용액

KS M ISO 9308-1의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

4.1. 시약

4.1.1 막여과법 배지

증류수 1L에 배지를 표 1의 조성대로 넣고 가열하여 녹인 후, 0.2N 수산화나트륨에 용해된 1% 로졸린산(Rosolic acid) 용액 10mL를 첨가한 다음, pH(7.4 ± 0.2)로 맞춘다.

표 1. 막여과법 고체배지(m-FC agar) 또는 막여과법 액체배지(m-FC) 조성

성 분	조 성
트립토스(tryptose)	10.0g
프로테우스 펩톤 또는 폴리펩톤(proteose peptone or polypeptone)	5.0g
효모추출물(yeast extract)	3.0g
염화나트륨(sodium chloride, NaCl, 58.50)	5.0g
젖당(lactose, C12H22O11, 342.30)	12.5g
담즙염(bile salts or bile salts mixture)	1.5g
아닐린 블루(aniline blue, C32H25N3O9S3Na2, 843.00)	0.1g
한천[agar, (C12H18O9)n] (액체배지에서는 첨가하지 않음)	15.0g

4.1.2 희석액

4.1.2.1 인산완충희석액

인산2수소칼륨(monopotassium phosphate, KH2PO4, 136.09) 34g을 500mL의 증류수에 녹인 후 0.5N 수산화나트륨(sodium hydroxide, NaOH, 40.00) 용액으로 실온에서 pH를 (7.2 ± 0.2)로 조정한 후 증류수를 넣어 1L가 되도록 만들어 이를 보존용 원액으로 한다. 이 보존용 원액 1.25mL와 염화마그네슘 6수화물(magnesium chloride, MgCl2·6H2O, 203.30) 81.1g을 증류수 1L에 녹여 만든 염화마그네슘용액 5.0mL를 넣은 다음 증류수로 1L가 되도록 하여 인산완충희석액을 만든 후 121℃에서 15분간 고압증기 멸균하여 사용한다.

4.1.2.2 펩톤희석액

증류수에 10% 펩톤(peptone) 용액을 넣어 펩톤의 최종 농도가 0.1%가 되도록 희석하고, 실온에서 pH가 (6.8 ± 0.2)가 되도록 조정한 다음 121℃에서 15분간 고압증기 멸균하여 사용한다.

4.2 표준용액

해당사항 없음

5.0 시료채취 및 관리

KS M ISO 5667-2, KS M ISO 5667-3의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

5.1 시료는 멸균된 용기를 이용하여 무균적으로 채취하여야 하며, 시료채취직전에 물 속에서 채수병의 뚜껑을 열고 폴리글러브를 착용하는 등 신체접촉에 의한 오염이 발생하지 않도록 유의하여야 한다.

5.2 수표면의 부유물질이나 침전물 등이 부상하여 유입되지 않도록 하여야 한다.

5.3 시료는 직사광선의 접촉을 피하여 약 10℃ 상태로 유지하여 실험실로 운반직후 분석하는 것을 원칙으로 하며, 최대 24시간을 넘기지 않도록 한다.

5.4 시료 중 잔류염소가 함유되었을 때에는 멸균된 10% 티오황산나트륨 용액으로 잔류염소를 제거하여야 한다. 120mL당 10% 티오황산나트륨 용액 0.1mL를 넣은 경우 잔류염소 15mg/L가 중화된다.

6.0 정도보증/정도관리(QA/QC)

해당사항 없음

7.0 분석절차

KS M ISO 9308-1의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

7.1 시료 전처리

해당사항 없음

7.2 시험방법

7.2.1 멸균된 핀셋으로 여과막을 눈금이 위로 가게하여 여과장치의 지지대 위에 올려놓은 후, 막여과장치의 깔때기를 조심스럽게 부착시킨다.

7.2.2 페트리접시에 20～80개의 세균 집락을 형성하도록 시료(표 2참조)를 여과관 상부에 주입하면서 흡입여과하고 멸균수 20～30mL로 씻어준다. 이 때 여과하여야 할 예상 시료량이 10mL보다 적을 경우에는 멸균된 희석액으로 희석하여 여과하여야 한다. 총대장균군수를 예측할 수 없을 경우에는 여과량을 달리하여 여러개의 시료를 분석하고, 모든 막여과 표면에서 200개 이상의 집락이 형성되지 않도록 하여야 한다.

표 2. 시료 종류별 예상 시료량

시료의 종류	여과해야 할 예상시료량(○, mL)
	100	50	10	1	0.1	0.01	0.001
호소, 저수지수 상수원수 위락용수 하수처리장 방류수 하천수 생활하수 축산폐수	○ ○	○ ○ ○	○ ○ ○	○ ○ ○ ○	○ ○ ○ ○	○ ○ ○	○ ○

7.2.3 막여과법 고체배지를 사용할 경우에는 여과한 여과막을 눈금이 위로 가게하여 페트리접시의 배지위에 올려놓은 다음 페트리접시를 거꾸로 놓고 배양기 내부 전체가 항상 균일하게 (44.5 ± 0.2)℃로 유지될 수 있는 정밀배양기에 넣어 (24 ± 2)시간 배양하거나, 페트리접시를 방수성 플라스틱 백에 넣은 후(44.5 ± 0.2)℃의 항온수조에 잠기도록 하여 배양한다. 막여과법 액체배지를 사용할 경우에는 1.8～2.0mL의 액체배지가 들어있는 페트리접시의 흡수패드 위에 여과한 여과막을 기포가 생기지 않도록 올려놓은 다음 배양기 내부 전체가 항상 균일하게 (44.5 ± 0.2)℃로 유지될 수 있는 정밀배양기에 넣어 (24 ± 2)시간 배양하거나, 페트리접시를 방수성 플라스틱 백에 넣은 후 (44.5 ± 0.2)℃의 항온수조에 잠기도록 하여 배양한다.

7.2.4 배양 후 여러 가지 색조를 띠는 파란색의 집락을 계수하며, 집락수가 20～80의 범위에 드는 것을 선정하여 다음의 식에 의해 계산한다.

분원성대장균군수/100mL		생성된 집락수	× 100
	=
		여과한 시료량 (mL)

7.2.5 배지표면에 분원성 대장균군 이외의 다른 세균이 너무 많이 자랐을 경우에는 분원성 대장균군수와 함께 이와 같은 내용을 비고에 기록하고 다시 같은 지점의 시료를 채취하여 검사한다. 재검사시에는 시료의 여과량을 줄이고 여과막의 수를 늘려 다른 세균에 의한 간섭현상을 줄인다.

7.2.6 본 분석방법을 처음 실시할 경우나 배지, 시약 등이 바뀔 때마다 양성대조군과 음성대조군 시험을 동시에 실시하여야 하며, 양성대조군 시험결과는 양성, 음성대조군 시험결과는 음성으로 나왔을 경우에만 유효한 결과값으로 판정한다. 이 때 양성대조군은 E.coli 표준균주를 사용하고, 음성대조군은 멸균 희석수를 사용하도록 한다.

8.0 결과보고

8.1 결과의 표기

‘분원성대장균군수/100mL’로 표기하며, 집락들이 서로 융합되어 있을 경우에는 ‘CG(Confluent Growth)’로, 집락수가 200이상으로 계수가 불가능한 경우에는 ‘TNTC(Too Numerous To Count)’로 표기하고 시료를 희석하거나 적게 취하여 다시 실험한다. 수질이 양호한 경우, 검출되는 분원성대장균군수가 일반적으로 낮으므로 모든 집락을 다 계수하여 표기하며 유효숫자 2자리 미만은 반올림하여 표기한다.

9.0 참고자료

9.1 Standard Method 9222, 21th edition, Membrane filter technique for members of the coliform group

9.2 HPA National standard method, W2, Enumeration of coliform bacteria and Escherichia coli by membrane filtration

9.3 일본 상수시험방법 8.2.3, 2001, 분변성대장균군 M-FC한천배지법

9.4 환경부, 먹는물공정시험방법(2004), 1-4

9.5 한국표준협회, KS M ISO 9308-1(2005), 수질-대장균체, 내열성 대장균체 및 E.coli로 추정되는 균체의 검출 및 계산-제1부:막여과법

10.0 부록

해당사항 없음

제54항 분원성대장균군 - 시험관법(ES 04702.2)
(Fecal coliform - Multiple tube fermentation method)

1.0 개요

1.1 목적

이 시험방법은 수계에 존재하는 분원성대장균군을 분석함에 있어 검사결과의 정확과 통일을 기하기 위해 필요한 제반사항에 대하여 규정함을 목적으로 한다.

1.2 적용범위

본 시험방법은 환경정책기본법의 환경기준에 규정된 분원성대장균군 시험에 적용하며, 분원성대장균군 시험방법의 제2법에 해당된다.

1.3 간섭물질

해당사항 없음

1.4 인용규격

본 시험방법은 다음과 같은 규격의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

KS M ISO 9308-2 수질-대장균체, 내열성 대장균체 및 E.coli로 추정되는 균체의 검출 및 계산-제2부 : 다중 튜브(최적확수)법

KS M ISO 5667-2 수질-시료채취-제2부 : 시료 채취 방법에 관한 지침

KS M ISO 5667-3 수질-시료채취(시료의 보존 및 취급에 대한 지침)

2.0 용어정의

“분원성대장균군”이란 온혈동물의 배설물에서 발견되는 그람음성․무아포성의 간균으로서 44.5℃에서 유당을 분해하여 가스 또는 산을 발생하는 모든 호기성 또는 통성 혐기성균을 말한다.

3.0 분석기기 및 기구

KS M ISO 9308-2의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

3.1 피펫

용량 1～25mL의 눈금피펫이나 자동피펫(플라스틱 피펫팁 포함)으로서 멸균된 것을 사용한다.

3.2 시험관

안지름 16mm, 높이 150mm정도의 시험관으로 마개를 할 수 있고, 고압증기멸균을 할 수 있어야 한다.

3.3 다람시험관

안지름 6mm, 높이 30mm 정도의 시험관으로 고압증기 멸균을 할 수 있어야 하며 가스포집을 위해 거꾸로 집어 넣는다.

3.4 백금이

고리의 안지름이 약 3mm인 백금이를 사용한다.

3.5 배양기 또는 항온수조

배양 온도를 (44.5 ± 0.2)℃로 유지할 수 있는 것을 사용한다.

4.0 시약 및 표준용액

KS M ISO 9308-2의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

4.1 시약

4.1.1 시험관법 추정시험용 배지

증류수 1L에 배지를 표 1 또는 표 2의 조성대로 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 (6.9 ± 0.2)가 되도록 조정한 다음 다람시험관이 들어있는 시험관에 10mL씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기멸균 한다. 시료를 10mL로 하는 경우는 배지의 농도를 2배로 하여 사용하여야 한다.

표 1. 시험관법 추정시험용 배지(Lactose broth) 조성

성 분	조 성
소고기추출물(beef extract)	3.0g
펩톤(peptone)	5.0g
젖당(lactose, C12H22O11, 342.30)	5.0g

표 2. 시험관법 추정시험용 배지(Lauryl tryptose broth) 조성

성 분	조 성
황산라우린산나트륨(sodium lauryl sulfate, C12H25NaO4S, 288.00)	0.1g
트립토스(tryptose)	20.0g
젖당(lactose, C12H22O11, 342.30)	5.0g
인산1수소칼륨(dipotassium phosphate, K2HPO4, 174.18)	2.75g
인산2수소칼륨(monopotassium phosphate, KH2PO4, 136.09)	2.75g
염화나트륨(sodium chloride, NaCl, 58.50)	5.0g

4.1.2 시험관법 확정시험용 배지

증류수 1L에 배지를 표 3의 조성대로 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 (6.9 ± 0.2)가 되도록 조정한 다음 다람시험관이 들어있는 시험관에 10mL씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기멸균 한다.

표 3. 시험관법 확정시험용 배지(EC) 조성

성 분	조 성
트립톤(tryptone) 또는 트립토스(tryptose) 또는 트립티케이스(trypticase)	20.0g
젖당(lactose, C12H22O11, 342.30)	5.0g
담즙염(bile salts)	1.5g
인산1수소칼륨(dipotassium phosphate, K2HPO4, 174.18)	4.0g
인산2수소칼륨(monopotassium phosphate, KH2PO4, 136.09)	1.5g
염화나트륨(sodium chloride, NaCl, 58.50)	5.0g

4.1.3 희석액

4.1.3.1 인산완충희석액

인산2수소칼륨(monopotassium phosphate, KH2PO4, 136.09) 34g을 500mL의 증류수에 녹인 후 0.5N 수산화나트륨(sodium hydroxide, NaOH, 40.00) 용액으로 실온에서 pH를 (7.2 ± 0.2)로 조정한 후 증류수를 넣어 1L가 되도록 만들어 이를 보존용 원액으로 한다. 이 보존용 원액 1.25mL와 염화마그네슘 6수화물(magnesium chloride, MgCl2·6H2O, 203.30) 81.1g을 증류수 1L에 녹여 만든 염화마그네슘용액 5.0mL를 넣은 다음 증류수로 1L가 되도록 하여 인산완충희석액을 만든 후 121℃에서 15분간 고압증기 멸균하여 사용한다.

4.1.3.2 펩톤희석액

증류수에 10% 펩톤(peptone) 용액을 넣어 펩톤의 최종 농도가 0.1%가 되도록 희석하고, 실온에서 pH가 (6.8 ± 0.2)가 되도록 조정한 다음 121℃에서 15분간 고압증기 멸균하여 사용한다.

4.2  표준용액

해당사항 없음

5.0 시료채취 및 관리

KS M ISO 5667-2, KS M ISO 5667-3의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

5.1 시료는 멸균된 용기를 이용하여 무균적으로 채취하여야 하며, 시료채취직전에 물 속에서 채수병의 뚜껑을 열고 폴리글러브를 착용하는 등 신체접촉에 의한 오염이 발생하지 않도록 유의하여야 한다.

5.2 수표면의 부유물질이나 침전물 등이 부상하여 유입되지 않도록 하여야 한다.

5.3 시료는 직사광선의 접촉을 피하여 약 10℃ 상태로 유지하여 실험실로 운반직후 분석하는 것을 원칙으로 하며, 최대 24시간을 넘기지 않도록 한다.

5.4 시료 중 잔류염소가 함유되었을 때에는 멸균된 10% 티오황산나트륨 용액으로 잔류염소를 제거하여야 한다. 120mL당 10% 티오황산나트륨 용액 0.1mL를 넣은 경우 잔류염소 15mg/L가 중화된다.

6.0 정도보증/정도관리(QA/QC)

해당사항 없음

7.0 분석절차

KS M ISO 9308-2의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

7.1 시료 전처리

해당사항 없음

7.2 시험방법

7.2.1 추정시험

분원성대장균군 추정시험은 총대장균군 추정시험과 동일하다.

7.2.1.1 시료를 10, 1, 0.1. 0.01, 0.001……mL씩 되게 10배 희석법에 따라 희석하여 사용하며, 시료의 오염정도에 따라 희석배수를 다르게 할 수 있다. 각 희석단계마다 5개의 시험관을 사용하며, 시료의 희석은 시료의 최대량을 이식한 5개의 시험관에서 전부 또는 대다수가 양성이고, 최소량을 이식한 5개의 시험관에서 전부 또는 대다수가 음성이 되도록 희석하여야 한다.

7.2.1.2 희석된 시료를 다람시험관이 들어있는 추정시험용 배지(유당 배지 또는 라우릴 트립토스 배지)에 접종하여 (35 ± 0.5)℃에서 (48 ± 3) 시간까지 배양한다. 이 때, 가스가 발생하지 않는 시료는 분원성대장균군 음성으로 판정하고 가스발생이 있을 때에는 추정시험 양성으로 판정하며 추정시험 양성 시험관은 확정시험을 수행한다.

7.2.2 확정시험

7.2.2.1 백금이를 사용하여 추정시험 양성 시험관으로부터 확정시험용 배지(EC 배지)가 든 시험관에 무균적으로 이식하여 (44.5 ± 0.2)℃에서, (24 ± 2) 시간 동안 배양한다. 이 때, 가스가 발생한 시료는 분원성대장균군 양성으로 판정하고, 가스가 발생하지 않는 시료는 분원성대장균군 음성으로 판정하며, 확정시험까지의 양성 시험관수를 최적확수표에서 찾아 분원성대장균군수를 결정한다. 최적확수표는 시료량이 10, 1, 0.1 mL의 희석단계에 대한 최적확수가 최적확수/100mL로 표시되어 있어, 그 이상 희석을 한 시료는 희석배수를 곱하여야 한다.

8.0 결과보고

8.1 결과의 표기

분원성대장균군 시험관법 시험결과는 확률적인 수치인 최적확수로 나타나지만, 결과는 ‘분원성대장균군수/100mL’로 표기하며, 유효숫자 2자리 미만은 반올림하여 표기한다.

9.0 참고자료

9.1 Standard Method 9221, 21th edition, Multiple-tube fermentation technique for members of the coliform group

9.2 HPA National Standard Method, D5, Enumeration of coliforms and presumptive Escherichia coli by the most probable number(MPN) technique

9.3 일본 상수시험방법 8.2.3.3, 2001, 분변성대장균군-EC배지법

9.4 환경부, 먹는물공정시험방법(2004), 1-4

9.5 한국표준협회, KS H ISO 7251(2002), 미생물학-추정 대장균 수의 계산을 위한 일반 지침-최확수법

10.0 부록

해당사항 없음

표 4. 분원성대장균군 시험관법 최적확수표

양 성 시험관수	MPN/	95% 신뢰구간		양 성 시험관수	MPN/	95% 신뢰구간
	100mL	하 한	상 한		100mL	하 한	상 한
0-0-0	<1.8	-	6.8	4-0-3	25	9.8	70
0-0-1	1.8	0.090	6.8	4-1-0	17	6.0	40
0-1-0	1.8	0.090	6.9	4-1-1	21	6.8	42
0-1-1	3.6	0.70	10	4-1-2	26	9.8	70
0-2-0	3.7	0.70	10	4-1-3	31	10	70
0-2-1	5.5	1.8	15	4-2-0	22	6.8	50
0-3-0	5.6	1.8	15	4-2-1	26	9.8	70
1-0-0	2.0	0.10	10	4-2-2	32	10	70
1-0-1	4.0	0.70	10	4-2-3	38	14	100
1-0-2	6.0	1.8	15	4-3-0	27	9.9	70
1-1-0	4.0	0.71	12	4-3-1	33	10	70
1-1-1	6.1	1.8	15	4-3-2	39	14	100
1-1-2	8.1	3.4	22	4-4-0	34	14	100
1-2-0	6.1	1.8	15	4-4-1	40	14	100
1-2-1	8.2	3.4	22	4-4-2	47	15	120
1-3-0	8.3	3.4	22	4-5-0	41	14	100
1-3-1	10	3.5	22	4-5-1	48	15	120
1-4-0	10	3.5	22	5-0-0	23	6.8	70
2-0-0	4.5	0.79	15	5-0-1	31	10	70
2-0-1	6.8	1.8	15	5-0-2	43	14	100
2-0-2	9.1	3.4	22	5-0-3	58	22	150
2-1-0	6.8	1.8	17	5-1-0	33	10	100
2-1-1	9.2	3.4	22	5-1-1	46	14	120
2-1-2	12	4.1	26	5-1-2	63	22	150
2-2-0	9.3	3.4	22	5-1-3	84	34	220
2-2-1	12	4.1	26	5-2-0	49	15	150
2-2-2	14	5.9	36	5-2-1	70	22	170
2-3-0	12	4.1	26	5-2-2	94	34	230
2-3-1	14	5.9	36	5-2-3	120	36	250
2-4-0	15	5.9	36	5-2-4	150	58	400
3-0-0	7.8	2.1	22	5-3-0	79	22	220
3-0-1	11	3.5	23	5-3-1	110	34	250
3-0-2	13	5.6	35	5-3-2	140	52	400
3-1-0	11	3.5	26	5-3-3	170	70	400
3-1-1	14	5.6	36	5-3-4	210	70	400
3-1-2	17	6	36	5-4-0	130	36	400
3-2-0	14	5.7	36	5-4-1	170	58	400
3-2-1	17	6.8	40	5-4-2	220	70	440
3-2-2	20	6.8	40	5-4-3	280	100	710
3-3-0	17	6.8	40	5-4-4	350	100	710
3-3-1	21	6.8	40	5-4-5	430	150	1100
3-3-2	24	9.8	70	5-5-0	240	70	710
3-4-0	21	6.8	40	5-5-1	350	100	1100
3-4-1	24	0.8	70	5-5-2	540	150	1700
3-5-0	25	9.8	70	5-5-3	920	220	2600
4-0-0	13	4.1	35	5-5-4	1600	400	4600
4-0-1	17	5.9	36	5-5-5	>1600	700	-
4-0-2	21	6.8	40

[별지 3]

제55항 대장균 - 효소이용정량법(ES 04703.1)
(Escherichia coli - Quantitative enzyme substrate method)

1.0 개요

1.1 목적

이 시험방법은 수계에 존재하는 대장균을 분석함에 있어 검사결과의 정확과 통일을 기하기 위해 필요한 제반사항에 대하여 규정함을 목적으로 한다.

1.2 적용범위

본 시험방법은 「수질 및 수생태계 보전에 관한 법률」의 행위제한 권고기준 등에 규정된 대장균 시험에 적용한다.

1.3 간섭물질

해당사항 없음

1.4 인용규격

본 시험방법은 다음과 같은 규격의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

KS M ISO 9308-3 수질-지표수와 폐수 중의 대장균과 대장균군의 검출 및 계수        방법-제3부 : 액상 배지에 접종하는 간편화된 MPN법

KS M ISO 5667-2 수질-시료채취-제2부 : 시료 채취 방법에 관한 지침

KS M ISO 5667-3 수질-시료채취(시료의 보존 및 취급에 대한 지침)

2.0 용어정의

“대장균”이란 글루쿠론산 분해효소(β-glucuronidase)의 활성을 가진 세균을 말한다.

3.0 분석기기 및 기구

KS M ISO 9308-3의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

3.1 피펫

용량 5～25mL의 눈금피펫이나 자동피펫(플라스틱 피펫팁 포함)으로서 멸균된 것을 사용한다.

3.2 막여과장치

여과막을 끼워서 여과할 수 있게 하는 장치로 무균조작 가능한 것을 사용하며, 멸균하여 사용하여야 한다.

3.3 페트리접시

지름 약 5.5cm, 높이 약 1.2cm의 유리제품이나 1회용 플라스틱제품으로 멸균된 것을 사용한다.

3.4 여과막

셀룰로오즈 나이트레이트(Cellulose nitrate)나 셀룰로오즈 에스테르(Cellulose ester) 재질로 공경 0.45μm, 직경 47mm크기의 미생물 분석용 여과막을 사용한다.

3.5 핀셋

끝이 뭉툭하고 넓으며 여과막을 집어 올릴 때 여과막을 손상시키지 않는 형태의 것으로 화염멸균 가능한 것을 사용한다.

3.6 시험관

안지름 16mm, 높이 150mm 정도의 시험관으로 마개를 할 수 있고, 고압증기 멸균을 할 수 있어야 한다.

3.7 다람시험관

안지름 6mm, 높이 30mm 정도의 시험관으로 고압증기 멸균을 할 수 있어야 하며 가스포집을 위해 거꾸로 집어 넣는다.

3.8 백금이

고리의 안지름이 약 3mm인 백금이를 사용한다.

3.9 자외선 검출기

365nm 부근 파장 조사가 가능하여야 한다.

3.10 자외선 방호안경

3.11 배양기 또는 항온수조

배양온도를 (35 ± 0.5)℃ 및 (44.5 ± 0.2)℃로 유지할 수 있는 것을 사용한다.

4.0 시약 및 표준용액

KS M ISO 9308-3의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

4.1. 시약

4.1.1 효소기질 배지 및 시약

막여과법을 이용하여 대장균을 시험할 경우, 대장균 추정시험용 막여과법 배지는 제50항 총대장균군-막여과법 4.1.1항 중 막여과법 고체배지의 조제방법을 따르며, 대장균 확정시험용 막여과법 배지는 증류수 1L에 배지를 표 1의 조성대로 넣고 가열하여 녹인 후 pH가 (6.8 ± 0.2)가 되도록 맞춘 다음 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다. 페트리접시에 있는 조제된 배지는  2～10℃의 냉암소에서 2주간 보관할 수 있다.

표 1. 대장균 확정시험용 막여과법 배지(NA-MUG) 조성

성 분	조 성
소고기 추출물(Beef extract)	3.0g
펩톤(peptone)	5.0g
MUG(4-Methylumbelliferyl-β-D-glucuronide)	0.1g
한천[agar, (C12H18O9)n]	15.0g

시험관법을 이용하여 대장균을 시험할 경우, 대장균 추정시험용 시험관법 배지는 제51항 총대장균군-시험관법 4.1.1항을 따르며, 대장균 확정시험용 시험관법 배지는 물 1L에 배지를 표 2의 조성대로 넣고 가열하여 녹인 후, pH(6.9 ± 0.2)로 맞춘 다음 시험관에 10mL씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다.

표 2. 대장균 확정시험용 시험관법 배지(EC-MUG) 조성

성 분	조 성
트립토스(tryptose)	20.0g
젖당(lactose, C12H22O11, 342.30)	5.0g
담즙염(bile salts)	1.5g
인산1수소칼륨(dipotassium phosphate, K2HPO4, 174.18)	4.0g
인산2수소칼륨(monopotassium phosphate, KH2PO4, 136.09)	1.5g
염화나트륨(sodium chloride, NaCl, 58.50)	5.0g
MUG(4-methylumbelliferyl-β-D-glucuronide)	0.05g

다중 웰(Multi-well)을 이용하여 대장균을 시험할 경우, 효소기질 시약은 대장균이 분비하는 효소인 글루쿠론산 분해효소(β-glucuronidase)에 의해 형광을 나타내는 기질을 포함하여야 하며, 막여과법 또는 시험관법을 이용하여 대장균을 분석하는 방법과 동등 또는 이상의 신뢰성 있고 정량 가능한 상용화된 제품을 사용한다.

사용방법은 제품의 설명서를 따른다.

4.1.2 희석액

4.1.2.1 인산완충희석액

인산2수소칼륨(monopotassium phosphate, KH2PO4, 136.09) 34g을 500mL의 증류수에 녹인 후 0.5N 수산화나트륨(sodium hydroxide, NaOH, 40.00) 용액으로 실온에서 pH를 (7.2 ± 0.2)로 조정한 후 증류수를 넣어 1L가 되도록 만들어 이를 보존용 원액으로 한다. 이 보존용 원액 1.25mL와 염화마그네슘 6수화물(magnesium chloride, MgCl2·6H2O, 203.30) 81.1g을 증류수 1L에 녹여 만든 염화마그네슘용액 5.0mL를 넣은 다음 증류수로 1L가 되도록 하여 인산완충희석액을 만든 후 121℃에서 15분간 고압증기 멸균하여 사용한다.

4.1.2.2 펩톤희석액

증류수에 10% 펩톤(peptone) 용액을 넣어 펩톤의 최종 농도가 0.1%가 되도록 희석하고, 실온에서 pH가 (6.8 ± 0.2)가 되도록 조정한 다음 121℃에서 15분간 고압증기 멸균하여 사용한다.

4.2  표준용액

해당사항 없음

5.0 시료채취 및 관리

KS M ISO 5667-2, KS M ISO 5667-3의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

5.1 시료는 멸균된 용기를 이용하여 무균적으로 채취하여야 하며, 시료채취직전에 물 속에서 채수병의 뚜껑을 열고 폴리글러브를 착용하는 등 신체접촉에 의한 오염이 발생하지 않도록 유의하여야 한다.

5.2 수표면의 부유물질이나 침전물 등이 부상하여 유입되지 않도록 하여야 한다.

5.3 시료는 직사광선의 접촉을 피하여 약 10℃ 상태로 유지하여 실험실로 운반직후 분석하는 것을 원칙으로 하며, 최대 24시간을 넘기지 않도록 한다.

5.4 시료 중 잔류염소가 함유되었을 때에는 멸균된 10% 티오황산나트륨 용액으로 잔류염소를 제거하여야 한다. 120mL당 10% 티오황산나트륨 용액 0.1mL를 넣은 경우 잔류염소 15mg/L가 중화된다.

6.0 정도보증/정도관리(QA/QC)

해당사항 없음

7.0 분석절차

KS M ISO 9308-3의 전부 또는 일부를 인용할 수 있다.

7.1 시료 전처리

해당사항 없음

7.2 시험방법

다음 7.2.1, 7.2.2, 7.2.3의 세 가지 방법 중 한 가지 방법으로 분석하며, 대장균수가 높다고 예측되는 경우에는 시료를 적당히 희석하여 분석하고, 대장균수를 예측할 수 없을 경우에는 희석배수를 달리하여 여러 개의 시료로 분석한다. 시료를 희석한 경우에는 희석배수를 곱하여 산출한다.

7.2.1 막여과법으로 대장균을 분석할 경우, 추정시험은 제50항 총대장균군-막여과법 7.2.3항의 막여과법 고체배지를 사용할 경우의 방법으로 수행하고, 금속성 광택을 띠는 분홍이나 진홍색 계통의 집락이 형성된 여과막을 무균적으로 대장균 확정시험용 막여과법 배지로 옮겨 (35 ± 0.5)℃에서 4시간 배양 후, 암 조건에서 자외선 검출기(366nm)를 조사하여 형광을 나타낸 금속성 광택의 집락수로 대장균수를 정량한다.

7.2.2 시험관법으로 대장균을 분석할 경우, 제51항 총대장균군-시험관법 7.2.1항의 방법으로 수행하고, 기포가 발생한 양성 시험관에서 백금이를 이용하여 대장균 확정시험용 시험관법 배지로 옮긴 다음, 배양기 내부 전체가 항상 균일하게 (44.5 ± 0.2)℃로 유지될 수 있는 정밀배양기 또는 항온수조에 넣어 (24 ± 2)시간 배양한 후, 자외선 검출기(366nm)를 조사하여 형광을 나타낸 양성결과를 제51항 총대장균군-시험관법의 최적확수표를 이용하여 정량한다.

7.2.3 다중 웰(Multi-well)을 이용할 경우에는 효소기질 시약과 시료 100mL를 혼합하여 배양한 후, 자외선 검출기(366nm)를 조사하여 형광이 검출되면 대장균 양성으로 판정하여 정량한다.

정량방법은 제품의 설명서를 따른다.

7.2.4 본 분석방법을 처음 실시할 경우나 배지, 시약 등이 바뀔 때마다 양성대조군과 음성대조군 시험을 동시에 실시하여야 하며, 양성대조군 시험결과는 양성, 음성대조군 시험결과는 음성으로 나왔을 경우에만 유효한 결과 값으로 판정한다. 이 때 양성대조군은 E.coli 표준균주를 사용하고, 음성대조군은 멸균 희석수를 사용하도록 한다.

8.0 결과보고

8.1 결과의 표기

‘대장균수/100mL’로 표기하며, 유효숫자 2자리 미만은 반올림하여 표기한다..

9.0 참고자료

9.1 Standard Method 9223, 21th edition, Enzyme substrate coliform test

9.2 HPA National Standard Method, W18, Enumeration of coliforms and Escherichia coli by IDEXX(Colilert 19) Quanti-TrayTM

9.3 일본 상수시험방법 8.2.2.1, 2001, 대장균 특정효소기질배지법

9.4 환경부, 먹는물공정시험방법(2004), 1-5. 제3법

10.0 부록

해당사항 없음